Résumé
PIN (Protein Inhibitor of Neuronal NO synthase) est une protéine « plateforme » capable d’interagir avec de nombreux partenaires comme la NO synthase neuronale (nNOS) et les protéines du cytosquelette, myosine V et tubuline. Nous avons précédemment démontré que PIN est un modulateur positif de la sécrétion d’insuline induite par le glucose. Afin de mieux comprendre le rôle de PIN, nous avons mis au point un peptide inhibiteur, capable de bloquer l’interaction de PIN avec ses partenaires protéiques et rendu cell-permeant grâce à un couplage avec la séquence Tat.
La sécrétion d’insuline a été mesurée dans les cellules β INS-1 en présence de glucose, du peptide inhibiteur ou d’un peptide irrelevant. Pour la microscopie TIRF, les cellules sont transfectées avec le rapporteur NPY-EGFP et la sécrétion d’insuline induite par 75 mm KCl.
Dans la lignée INS-1, le peptide inhibiteur diminue la sécrétion d’insuline induite par 2,8, 5,6 et 8,3 mM de glucose, de 33 % à 20 µM, et de 58 % à 40 µM (p < 0,001). Cet effet inhibiteur est également observé avec un siRNA PIN, qui diminue l’expression de PIN et réduit la sécrétion d’insuline de 14 et 20 % en réponse à 5,6 et 8,3 mM de glucose (p < 0,001). De façon surprenante, en présence du peptide inhibiteur, nous observons une diminution de la quantité d’α-tubuline soluble détectée par Western blot de 22 % à 20 µM et 95 % à 40 µM, suggérant une polymérisation accrue de la tubuline. Enfin, par microscopie TIRF, le temps de relargage des granules sécrétoires est augmenté de 3 fois en présence du peptide inhibiteur, traduisant un ralentissement de la migration des granules.
La protéine PIN aurait donc un rôle dans la migration des vésicules sécrétoires d’insuline, en modulant la polymérisation de la tubuline.
Les auteurs déclarent ne pas avoir d’intérêt direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme privé, industriel ou commercial en relation avec le sujet présenté.