Résumé
La NO synthase neuronale (nNOS) peut, chez le rat, moduler à la fois l’amplitude et la cinétique de la sécrétion d’insuline. Notre objectif est de confirmer son expression dans les cellules β pancréatiques humaines et d’évaluer sa fonctionnalité.
L’expression de la nNOS a été étudiée dans des extraits d’îlots humains par RT-PCR quantitative ainsi que par Western Blot. Sa localisation cellulaire a été précisée par immunofluorescence et microscopie confocale. Enfin, la sécrétion insulinique a été évaluée sur 10 îlots pendant 90 minutes, en présence de concentrations croissantes de glucose et d’inhibiteurs pharmacologiques de l’enzyme, le Nω-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) et le 7-nitroindazole (7-NI), plus sélectif de l’isoforme neuronale.
La nNOS est exprimée dans les îlots pancréatiques humains tant au niveau ARN messager qu’au niveau protéique. Elle est préférentiellement cytoplasmique, mais aussi nucléaire et mitochondriale, et co-localise avec les granules de sécrétion d’insuline. Sur le plan fonctionnel, l’inhibition de l’activité nNOS par le L-NAME et le 7-NI stimule de façon dose-dépendante la sécrétion d’insuline induite par le glucose. À 8,3 mM de glucose, la sécrétion d’insuline est de 24,3
±
1,9 ng/mL/10 îlots/90 min et est amplifiée à 29
±
3,6 et 34,5
±
3,37 en présence de respectivement 5
mM (non significatif) et 10
mM (p
<
0,01) de L-NAME, et à 36,2
±
3,2 et 37
±
3,2 avec 100
μM (p
<
0,01) et 200
μM (p
<
0,01) de 7-NI. La sécrétion d’insuline induite par 16,7 mM de glucose atteint 34,8
±
2,9 ng/mL/10 îlots/90 min et augmente à 43,3
±
3,5 et 51,5
±
6,1 avec 5 mM (p
<
0,05) et 10
mM (p
<
0,05) de L-NAME, et à 53,1
±
4,9 et 68,4
±
5,6 avec 100
μM (p
<
0,01) et 200
μM (p
<
0,001) de 7-NI.
Des résultats similaires avaient précédemment été retrouvés chez le rat. D’autres expériences associant inhibiteurs de l’activité cytochrome c réductase et donneurs de NO sont nécessaires pour préciser le rôle des différentes activités catalytiques de l’enzyme
.
La nNOS est exprimée dans les cellules β humaines et intervient dans la régulation de la sécrétion insulinique glucose-dépendante.