Résumé
NADH: nitrate reductase (EC 1.6.6.1) was purified from
Nicotiana plumbaginifolia leaves. As recently observed with nitrate reductase from other sources, this enzyme is able to reduce nitrate using reduced bromphenol blue (rBPB) as the electron donor. In contrast to the physiological NADH-dependent activity, the rBPB-dependent activity is stable
in vitro. The latter activity is non-competitively inhibited by NADH.
The monoclonal antibody ZM.96(9)25, which inhibits the NADH: nitrate reductase total activity as well as the NADH: cytochrome
c reductase and reduced methyl viologen (rMV): nitrate reductase partial activities, has no inhibitory effect on the rBPB: nitrate reductase activity. Conversely, the monoclonal antibody NP.17-7(6) inhibits nitrate reduction with all three electron donors: NADH, MV or BPB.
Among various nitrate reductase-deficient mutants, an apoprotein gene mutant (
nia. E56) shows reduced terminal activities but a highly increased rBPB: nitrate reductase activity. rBPB: nitrate reductase thus appears to be a new terminal activity of higher plant nitrate reductase and involves specific sites which are not shared by the other activities.
La nitrate réductase des feuilles de
Nicotiana plumbaginifolia a été purifiée. Comme cela a été montré pour d'autres sources, cette enzyme est capable de réduire les nitrates en nitrites
in vitro en utilisant le bleu de bromophénol réduit comme donneur d'électron. A l'opposé de l'activité physiologique, NADH dépendante, l'activité rBPB: nitrate réductase est stable. Le NADH est un inhibiteur non-compétitif de cette activité.
L'immunosélection par des anticorps monoclonaux démontre sans ambiguïté que les activités NADH et rBPB: nitrate réductase sont exercées par la même espèce moléculaire. Pourtant, l'anticorps monoclonal ZM.96(9)25, inhibiteur de l'activité totale NADH: nitrate réductase et des activités partielles NADH: cytochrome c réductase et rMV: nitrate réductase, n'inhibe pas l'activité rBPB: nitrate réductase. A l'opposé l'anticorps monoclonal NP.17-7(6) inhibe toutes les activités nitrate réductase, que le donneur d'électron soit le NADH, le méthyl viologène ou le bleu de bromophénol réduits.
Parmil les mutants déficients pour l'activité nitrate réductase, un mutant affecté gène de l'apoprotéine (nia, E56) voit ses activités terminales rMV et FMNH
2 dépendantes diminuées tandis que l'activité rBPB: nitrate réductase est, au contraire, fortement augmentée.
L'ensemble de ces résultats montre que l'activité enzymatique rBPB dépendante est une nouvelle activité terminale de la nitrate réductase des plantes supérieures, qui met en jue des sites spécifiques qui ne sont pas partagés par les autres activités de cette enzyme.