Résumé
Les protéines Ten – Eleven Translocation (TET1-3) sont des régulateurs clés de la voie active de déméthylation de l'ADN. Ces enzymes déclenchent une série de réactions d’oxydation qui jouent un rôle essentiel dans le contrôle de l’expression des gènes et, de fait, dans le contrôle de multiple mécanismes cellulaires y compris la prolifération et la différenciation cellulaire. Dans de nombreux cancers y compris dans certains cancers solides tels que le cancer colorectal (CRC), l’expression et l’activité des TETs sont fréquemment diminuées. Certains facteurs alimentaires, métaboliques et environnementaux ont été identifiés comme capables d’influencer l'activité et/ou l'expression des TETs. La VitC est bien reconnue pour son rôle stimulant de la déméthylation de l’ADN mais les mécanismes moléculaires impliqués ne sont pas clairement élucidés. D’autre part, le Linuron, un herbicide à base de phénylurée, est connu pour sa génotoxicité, mais ses effets sur les TETs n'ont pas été étudiés.L'objectif principal de cette thèse a été d’étudier la distribution subcellulaire des TETs et en particulier de TET1 dans les cellules coliques non tumorales et tumorales et d'évaluer l'impact de la VitC et du Linuron sur cette distribution subcellulaire. Une étude par immunofluorescence a mis en évidence une nouvelle compartimentation de TET1 et le marqueur de son activité de déméthylation, la 5hydroxyméthylcytosine (5hmC), dans des corps nucléaires des cellules de CRC. En étudiant l'interaction potentielle entre TET1/5hmC et les protéines formant des corps nucléaires dans les cellules CRC, nous avons observé leur colocalisation avec les corps de Cajal (CB) mais pas avec ceux marqués positivement pour la protéine de leucémie promyélocytaire (PML). De plus, les cellules CRC traitées à VitC ont révélé une augmentation du nombre et de la taille des corps nucléaires de 5hmC, PML et CBs. Fait intéressant, l'imagerie confocale a révélé que la VitC potentialisait l'interaction des corps de 5hmC avec les corps de PML et de Cajal. A l’inverse, l'analyse confocale de TET1 a révélé que l'exposition au Linuron induisait une diminution significative du nombre de corps nucléaires de TET1 ainsi qu’une augmentation de la prolifération et de l'invasivité des cellules tumorales coliques.Ce travail a permis d’identifier de nouveaux corps nucléaires concentrant TET1 et 5hmC dans les cellules tumorales coliques et de démontrer que le nombre, la taille et les propriétés dynamiques de ces corps nucléaires sont inversement modulées par la VitC et le Linuron. Ces résultats mettent en évidence de nouvelles fonctions biologiques pour TET1 et ouvrent de nouvelles perspectives de recherche en oncologie digestive.