Résumé
La microcine E492 (MccE492) est un peptide de 7,8 kDa, anionique et hydrophobe, naturellement sécrété par Klebsiella pneumoniae RYC492. MccE492 a été purifiée et caractérisée à partir de cultures de la souche recombinante E. coli VCS257 portant le plasmide pJAM229. Selon les milieux de culture utilisés, MccE492 est produite sous la forme connue de 7,8 kDa, ou sous une forme dont la masse moléculaire est de 8,7 kDa (MccE492m). Nous avons montré qu'elles diffèrent par la présence d'une substitution sur la région C-terminale. Nous avons optimisé un système d'expression et de purification des deux formes de MccE492 à grande échelle qui permet d'extraire les microcines pures avec des rendements de l'ordre de 2 à 3 mg/litre. MccE492 présente une activité antibactérienne puissante sur certaines espèces d'Escherichia et de Salmonella avec des valeurs de CMI de l'ordre du nanomolaire. La modification rend la microcine environ 5 fois plus active sur les souches de Salmonella. Bien que limité aux espèces d'entérobactéries, le spectre d'activité de MccE492m est plus étendu que celui de MccE492. Les deux microcines ont un effet bactéricide sur les cellules sensibles. Comme de multiples peptides antimicrobiens agissant par déstabilisation membranaire, MccE492 et MccE492m acquièrent une conformation en hélice alpha en milieu micellaire mimant les membranes biologiques, alors qu'elles sont non structurées en solution aqueuse. In vitro, elles sont capables de former des canaux dans les bicouches lipidiques. Cette activité est retrouvée dans des expériences in vivo où nous montrons pour la première fois que MccE492 et MccE492m induisent la perméabilisation des deux membranes, interne et externe, d'E. coli ML35. Nos résultats suggèrent que l'action perméabilisante de MccE492 est dissociée de son effet létal. Le mode d'action de MccE492 et MccE492m impliquerait ainsi d'autres cibles cellulaires que les phospholipides membranaires et pourrait notamment reposer sur l'interaction avec un récepteur.