Résumé
La microcine E492 (MccE492) est un peptide antimicrobien anionique et hydrophobe de 84 acides aminés, isolé pour la première fois à partir de la souche fécale RYC492 de Klebsiella pneumoniae. MccE492 est purifiée à partir du surnageant de culture de la souche recombinante Escherichia coli VCS257 portant le système génétique de MccE492 sur le plasmide pJAM229. MccE492, dont la structure inclut du feuillet beta en milieu tamponné, acquiert une structure en hélice beta en milieu mimant les membranes. Elle forme des canaux ioniques indépendants du potentiel dans les bicouches lipidiques planes. Nous avons montré l'absence de relation directe entre l'effet létal et l'action perméabilisante de la membrane cytoplasmique, suggérant que MccE492 a un mécanisme d'action complexe, incluant notamment une interaction avec un récepteur membranaire. A ce jour, MccE492 (7887 Daltons) était considérée comme un peptide non modifié. Cependant, nous avons mis en évidence une seconde forme de MccE492 (MccE492m) de masse plus élevée (8719 Daltons) présentant une meilleure activité antimicrobienne (spectre d'activité sensiblement plus étendu et efficacité 2 à 5 fois plus grande). Nous avons montré que MccE492m portait une modification post-traductionnelle sur sa sérine C-terminale. Des expériences de spectrométrie de masse MS3 et MS4 à l'aide d'une trappe ionique, et de RMN bidimensionnelle ont permis d'identifier plusieurs éléments de la modification. Celle-ci contient notamment de la 2,3-dihydroxybenzoylsérine, produit de dégradation de l'entérocheline, un sidérophore favorisant le transport du fer à l'intérieur des bactéries. Récemment, nous avons montré que FepA, le récepteur du couple fer/entérochéline, pouvait être impliqué dans l'import de MccE492. La modification de MccE492 pourrait donc intervenir dans la reconnaissance de la microcine à la membrane externe de la bactérie cible, améliorant ainsi l'affinité du peptide antimicrobien pour l'un de ses récepteurs.