Résumé
Les produits pharmaceutiques sont des contaminants émergents pouvant présenter des risques pour lesorganismes du milieu aquatique. En effet, ces composés synthétisés pour avoir une activité biologique chezl’Homme, passent la barrière des stations d’épuration et sont rejetés dans les milieux aquatiques. Les milieuxmarins sont également touchés en raison du développement d’émissaires en mer (rejets direct en mer desstations d’épuration) et des apports des bassins versants via les fleuves et rivières côtiers. Les moules, desorganismes couramment rencontrées dans des zones côtières, sont concernées par une exposition auxproduits pharmaceutiques. La Directive Cadre sur l’Eau (2013/39/EC) a récemment inclus dans sa liste devigilance des produits pharmaceutiques, dont le diclofénac (DCF). Des effets du diclofénac tels que lamodulation des prostaglandines (Courant et al, submitted) ou encore une fragilisation et une diminution de laquantité de byssus (Ericson et al, 2010) ont été renseignés pour des expositions à concentrationsenvironnementale. A notre connaissance, aucune information n’est disponible concernant la métabolisationde ce produit pharmaceutique chez les bivalves. L’objectif de notre étude est donc de déterminer, lors d’uneexposition en conditions contrôlées, les métabolites du DCF produits par la moule Mytilus galloprovinciallis etde quantifier ceux pour lesquels des standards analytiques sont disponibles. Pour cela, une approche nonciblée a été développée afin de mettre en évidence l’ensemble des métabolites du DCF produits par la moule.Puis, une méthode analytique ciblée a été développée pour quantifier les métabolites mis en évidence.Deux groupes de 18 moules ont été constitués : un groupe contrôle et un groupe exposé durant 7 jours à650 μg/L de DCF. Les analyses effectuées par la méthode non-ciblée ont été réalisées par chromatographieliquide couplée à un spectromètre de masse haute résolution (LC/HRMS), en ionisation négative et positive.Un traitement par XCMS a été effectué, puis seuls les signaux avec un foldchange supérieur à 2 et d’uneintensité proche du bruit de fond dans les contrôles ont été conservés. Une méthode ciblée utilisant laLC/HRMS a été développée pour quantifier le DCF, le 4’-hydroxy diclofenac (4’OH-DCF) et le 5-hydroxydiclofénac (5OH-DCF) dans les tissus de moules et dans l’eau de mer d’exposition.Différents métabolites du DCF ont été annotés : deux de ses quatre métabolites hydroxylés connus (le4’OH-DCF et le 5OH-DCF), le conjugué sulfate d’un de ses métabolites hydroxylés, un métabolite hydroxylélactame déhydrate et le conjugué taurine du DCF. Un travail d’élucidation structurale est en cours sur d’autressignaux probablement reliés au DCF. Par ailleurs, les deux métabolites hydroxylés du DCF ont pu êtreidentifiés formellement grâce à l’injection de standards analytiques dans les mêmes conditions d’analyse.La quantification du DCF, du 4’OH-DCF et du 5-OH-DCF a permis de mettre en évidence que le DCF estmétabolisé et excrété par la moule en moins de 24h et que le 4’OH-DCF est majoritaire par rapport au 5OHDCF. Ces résultats sont un premier pas dans la caractérisation de l’exposition aux produits pharmaceutiqueschez M. galloprovinciallis.