Résumé
Criblage d’une banque de glycoclusters sur DDI-glycoarray : Application à Pseudomonas aeruginosa. Lucie Dupin1, Alice Goudot1, Eliane Souteyrand1, Olivier Vidal4, François Morvan2, Emmanuelle Laurenceau1, Sébastien Vidal3, Jean-Jacques Vasseur2, Francesca Casoni2, Caroline Ligeour2 Albert Meyer2, Thomas Gehin1, Yann Chevolot1 1 UMR5270, Université de Lyon, INL/ECL, 36 avenue Guy de Collongue, 69134 Ecully Cedex 2 UMR 5247, Institut des Biomolécules Max Mousseron, CNRS/Université Montpellier1/2, Université de Montpellier II CC1704, Place E. Bataillon 34095 Montpellier Cedex 5, France 3 UMR 5246, Institut de Chimie et Biochimie Moléculaires et Supramoléculaires, CNRS - Université Lyon Claude Bernard 1 – CPE - INSA, Laboratoire de Chimie Organique 2 - Glycochimie, 43 Boulevard du 11 Novembre 1918, 69622 Villeurbanne, France 4 UMR 8576, Unité de Glycobiologie Structurelle et Fonctionnelle (UGSF), Université de Lille 1 - Cité Scientifique, Avenue Mendeleiev, Bat C9, 59655 Villeneuve d'Ascq cedex Le DDI-glycoarray est une technologie qui permet d’étudier les interactions lectines-glycoclusters. L’immobilisation des glycoclusters par hybridation spécifique d’ADN permet de réaliser une étude multiplexée et une analyse à haut débit de ces interactions tout en utilisant une très faible quantité d’échantillon (quelques pmoles)1. Cet outil permet également la caractérisation de chaque glycoclusters par une mesure de fluorescence, d’IC50 et de Kd2. Nous étudions ici Pseudomonas aeruginosa qui est une bactérie opportuniste impliquée dans 10-30% des maladies nosocomiales par le fait qu’elle a développé des résistances aux antibiothérapies conventionnelles. Le DDI-glycoarray permet donc un criblage d’une banque de glycoclusters capable d’interagir avec une lectine de Pseudomonas aeruginosa dans le but de trouver de nouveaux agents anti-infectieux. Nous avons principalement étudié PA-IL, une lectine de Pseudomonas aeruginosa reconnaissant spécifiquement le D-Galactose3. Le DDI-glycoarray a été utilisé pour déterminer l’affinité d’environs 150 glycoclusters vis-à-vis de PA-IL. Dans cette étude, l’affinité du glycocluster pour PA-IL est importante lorsque la mesure de fluorescence émise par la lectine est grande, l’IC50 est grand et le Kd petit. Ces trois mesures permettent le classement des glycoclusters les uns par rapport aux autres vis-à-vis de leur affinité pour PA-IL. Elles permettent également de déterminer les paramètres de configurations des glycolcusters qui sont important pour leur interaction avec PA-IL. De cette étude est donc ressortit que des glycoclusters à cœur centré mannose portant des bras longs et flexibles ainsi qu’un cycle aromatique près du galactose terminal augmenté significativement l’interaction avec PA-IL. (1) Chevolot, Y.; Bouillon, C.; Vidal, S.; Morvan, F.; Meyer, A.; Cloarec, J. P.; Jochum, A.; Praly, J. P.; Vasseur, J. J.; Souteyrand, E. Angew. Chemie. Int. Ed. English 2007, 46, 2398–2402. (2) Goudot, A.; Pourceau, G.; Meyer, A.; Gehin, T.; Vidal, S.; Vasseur, J. J.; Morvan, F.; Souteyrand, E.; Chevolot, Y. Biosens. Bioelectron. 2013, 40, 153–160. (3) Imberty, A.; Wimmerova, M.; Mitchell, E. P.; Gilboa-Garber, N. Microbes Infect. 2004, 6, 221–228.