Résumé
La microcine E492 (MccE492) est un peptide antimicrobien anionique et hydrophobe de 84 acides aminés qui a été purifié à partir du surnageant de culture de la souche recombinante Escherichia coli VCS257 portant le système génétique de MccE492 sur le plasmide pJAM229. Jusqu'à ce jour, MccE492 (7887 u) était considérée comme un peptide non modifié. Cependant, nous avons mis en évidence une seconde forme (MccE492m) de masse plus élevée (8719 u) présentant une meilleure activité antimicrobienne. Afin de localiser et d'identifier la modification post-traductionnelle, des expériences de spectrométrie de masse MSn à l'aide d'un piège ionique, ont été entreprises sur un fragment de MccE492m (1770.5 u) obtenu par hydrolyse par la chymotrypsine et purifié par HPLC. En mode positif, le spectre CID de l'ion [M+2H]2+ m/z 886.7 conduit à une série d'ions b et d'ions y, ces derniers comportant la modification, qui permettent de la localiser au niveau du résidu sérine C-terminal. En mode négatif, la MS/MS de l'ion [M-2H]2- conduit en faible abondance à un ion de rapport m/z 848.2 correspondant à la modification. Cet ion a été sélectionné et soumis à l'excitation résonante. Les informations structurales obtenues conjointement aux donnés de RMN ont permis de caractériser cette modification. Elle implique la présence de trois monomères de 2,3-dihydroxybenzoyl sérine (DHBS), attachés à la sérine C-terminale via une entité osidique. La structure obtenue est en bon accord avec une mesure de masse exacte effectuée à l'aide d'un instrument hybride quadrupole/temps de vol. La DHBS est un composé résultant de la dégradation de l'entérochéline, un sidérophore qui assure le transport du fer chez les entérobactéries. En améliorant l'affinité du peptide antimicrobien pour le récepteur du couple fer/entérochéline, qui est impliqué dans l'import de MccE492, la modification pourrait intervenir dans la reconnaissance de la microcine à la membrane externe de la bactérie